{"id":2192,"date":"2018-05-26T18:40:00","date_gmt":"2018-05-26T18:40:00","guid":{"rendered":"http:\/\/ka120-121.iessansebastian.com\/index.php\/2018\/05\/26\/transformacion-pglo-kit-de-transformacion-bacteriana-con-pglo-numero-de-catalogo-166-0003edu\/"},"modified":"2026-01-28T00:04:30","modified_gmt":"2026-01-28T00:04:30","slug":"transformacion-pglo-kit-de-transformacion-bacteriana-con-pglo-numero-de-catalogo-166-0003edu","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/ka120-121.iessansebastian.com\/index.php\/2018\/05\/26\/transformacion-pglo-kit-de-transformacion-bacteriana-con-pglo-numero-de-catalogo-166-0003edu\/","title":{"rendered":"Transformaci\u00f3n PGLO (Kit de transformaci\u00f3n bacteriana con pGLO) N\u00famero de cat\u00e1logo 166-0003EDU"},"content":{"rendered":"<div style=\"clear: both;text-align: left\">\n  <a href=\"https:\/\/gaysocialites.com\/\" target=\"_blank\">sophie rain onlyfans net worth<\/a><\/div>\n<div style=\"clear: both;text-align: left\">\n<div style=\"text-align: right\">\n<iframe allowfullscreen=\"\" frameborder=\"0\" height=\"266\" src=\"https:\/\/www.youtube.com\/embed\/beQk8eOFnrA?feature=player_embedded\" style=\"clear: right;float: right\" width=\"320\"><\/iframe>En esta pr\u00e1ctica, los estudiantes realizar\u00e1n un procedimiento conocido como transformaci\u00f3n<br \/>\ngen\u00e9tica. La transformaci\u00f3n gen\u00e9tica ocurre cuando una c\u00e9lula capta y expresa una nueva porci\u00f3n de<br \/>\nmaterial gen\u00e9tico (ADN). Esta nueva informaci\u00f3n gen\u00e9tica suele proporcionar al organismo una nueva<br \/>\ncaracter\u00edstica que es identificable despu\u00e9s de la transformaci\u00f3n. Transformaci\u00f3n gen\u00e9tica significa<br \/>\nliteralmente cambio causado por genes, e implica la inserci\u00f3n de uno o m\u00e1s genes en un organismo,<br \/>\ncon el objetivo de modificar las caracter\u00edsticas de dicho organismo.<br \/>\nLa transformaci\u00f3n gen\u00e9tica se usa en muchas \u00e1reas de la biotecnolog\u00eda.&nbsp;<\/div>\n<\/div>\n<p><\/p>\n<h3>\n<span style=\"color: blue\">El sistema pGLO<\/span><\/h3>\n<p>\nCon el kit de transformaci\u00f3n pGLO, los estudiantes realizan un sencillo procedimiento para<br \/>\ntransformar bacterias con un gen que codifica la s\u00edntesis de una prote\u00edna denominada GFP (Green<br \/>\nFluorescent Protein). La fuente natural de este gen es una medusa fosforescente llamada Aequorea<br \/>\nvictoria, en la que la GFP es la responsable de que la medusa brille o emita fluorescencia en la<br \/>\noscuridad. Despu\u00e9s de la transformaci\u00f3n, las bacterias expresan el gen de la medusa y sintetizan la<br \/>\nprote\u00edna, lo que les permite emitir un color verde brillante cuando son expuestas a luz ultravioleta.<\/p>\n<p>El pl\u00e1smido pGLO de BioRad contiene el gen para la s\u00edntesis de la prote\u00edna GFP y un gen de<br \/>\nresistencia al antibi\u00f3tico ampicilina. pGLO tambi\u00e9n contiene un sistema especial de regulaci\u00f3n de<br \/>\ngenes que se puede usar para controlar la expresi\u00f3n de la prote\u00edna fluorescente en las c\u00e9lulas<br \/>\ntransformadas. El gen para sintetizar GFP se puede activar en las c\u00e9lulas transformadas simplemente<br \/>\na\u00f1adiendo arabinosa al medio de cultivo. La selecci\u00f3n de las c\u00e9lulas que se han transformado con el<br \/>\npl\u00e1smido pGLO se realiza observando el crecimiento en placas con antibi\u00f3tico. Las c\u00e9lulas<br \/>\ntransformadas aparecer\u00e1n blancas (fenotipo salvaje) en placas que no contengan arabinosa, y de color<br \/>\nverde fluorescente cuando se a\u00f1ada arabinosa al agar. La singular estructura de pGLO permite a&nbsp; profesores y estudiantes, por primera vez, estudiar f\u00e1cilmente los mecanismos de la regulaci\u00f3n g\u00e9nica<br \/>\ny la selecci\u00f3n de genes. Y todo el proceso se puede observar con una simple l\u00e1mpara de luz<br \/>\nultravioleta.<\/p>\n<h3>\n<b><span style=\"color: blue\">Metodolog\u00eda:<\/span><\/b><\/h3>\n<p><b><span style=\"color: blue\">&#8211; Preparaci\u00f3n paso 1<\/span><\/b><\/p>\n<p><i><span style=\"color: blue\">1. Preparar el agar<\/span><\/i><\/p>\n<p>&nbsp;Las placas se deben preparar al menos 3 d\u00edas antes de&nbsp; realizar la pr\u00e1ctica.<\/p>\n<p>Se<br \/>\ndeben almacenar 2 d\u00edas a temperatura ambiental y luego bajo refrigeraci\u00f3n hasta el momento de su<br \/>\nuso.<\/p>\n<div style=\"clear: both;text-align: center\">\n<a href=\"http:\/\/4.bp.blogspot.com\/-WkJPQGp9SUU\/Wwm07pg2hbI\/AAAAAAAAEdg\/DYdYDb3JKJYUa2f_1WDs7enlaQNNBn-JgCK4BGAYYCw\/s1600\/agar.png\" style=\"margin-left: 1em;margin-right: 1em\"><img decoding=\"async\" border=\"0\" height=\"115\" src=\"https:\/\/4.bp.blogspot.com\/-WkJPQGp9SUU\/Wwm07pg2hbI\/AAAAAAAAEdg\/DYdYDb3JKJYUa2f_1WDs7enlaQNNBn-JgCK4BGAYYCw\/s320\/agar.png\" width=\"320\" \/><\/a><\/div>\n<p>Para preparar el agar, a\u00f1adir 500 ml de agua destilada a un matraz Erlenmeyer de 1 litro. A\u00f1adir el<br \/>\ncontenido del paquete de agar LB. Agitar el matraz para disolver el agar, y calentar hasta ebullici\u00f3n en<br \/>\nel microondas. Volver a agitar y calentar unas tres veces m\u00e1s hasta que el agar se disuelva, teniendo<br \/>\ncuidado de dejar enfriar el matraz antes de agitarlo, para evitar que el medio caliente salte a la mano.<br \/>\nCuando el agar se haya disuelto, dejarlo enfriar hasta que el matraz se pueda tocar sin quemarse (50<br \/>\n\u00baC).<\/p>\n<p>&nbsp;Mientras se enfr\u00eda el agar, etiquetar las placas y preparar la arabinosa y la ampicilina. Tener cuidado de que el agar no se enfr\u00ede tanto que llegue a solidificar.<\/p>\n<p>\n<i><span style=\"color: blue\">2. Preparar la arabinosa y la ampicilina<\/span><\/i><\/p>\n<p><\/p>\n<div style=\"clear: both;text-align: center\">\n<\/div>\n<p><a href=\"http:\/\/2.bp.blogspot.com\/-k07mEpffkIc\/Wwm2P7e75JI\/AAAAAAAAEds\/YFS-w4YyptwOHz2G0VmfHM9igoGPn4XyQCK4BGAYYCw\/s1600\/ampicilina.png\" style=\"clear: right;float: right;margin-bottom: 1em;margin-left: 1em\"><img fetchpriority=\"high\" decoding=\"async\" border=\"0\" height=\"168\" src=\"https:\/\/2.bp.blogspot.com\/-k07mEpffkIc\/Wwm2P7e75JI\/AAAAAAAAEds\/YFS-w4YyptwOHz2G0VmfHM9igoGPn4XyQCK4BGAYYCw\/s320\/ampicilina.png\" width=\"320\" \/><\/a>&nbsp;La arabinosa se encuentra deshidratada en un peque\u00f1o vial. Con una pipeta est\u00e9ril, a\u00f1ade 3 ml de la<br \/>\nsoluci\u00f3n de transformaci\u00f3n en el vial para rehidratar el az\u00facar. Agita el vial, mejor con la ayuda de un<br \/>\nv\u00f3rtex. (Se utiliza la soluci\u00f3n de transformaci\u00f3n porque est\u00e1 est\u00e9ril. En su lugar se puede utilizar agua<br \/>\ndestilada est\u00e9ril).<br \/>\nLa ampicilina tambi\u00e9n est\u00e1 envasada en un peque\u00f1o vial y deshidratada. Con otra pipeta est\u00e9ril,<br \/>\na\u00f1ade 3 ml de la soluci\u00f3n de transformaci\u00f3n al vial para rehidratar el antibi\u00f3tico (Se utiliza la soluci\u00f3n<br \/>\nde transformaci\u00f3n porque est\u00e1 est\u00e9ril. En su lugar se puede utilizar<br \/>\nagua destilada est\u00e9ril).<\/p>\n<p>\n<i><span style=\"color: blue\">3. Rotular las placas<\/span><\/i><\/p>\n<p>Las 40 placas de agar se deben rotular con un rotulador de tinta indeleble en la base, cerca del borde<br \/>\nde la placa.<br \/>\nRotular 16 placas como LB, 16 como LB\/amp y 8 como LB\/amp\/ara.<\/p>\n<p>\n<i><span style=\"color: blue\">4. A\u00f1adir el agar LB en las placas&nbsp;<\/span><\/i><\/p>\n<p>Primero, a\u00f1adir el agar LB en las placas marcadas como LB.<br \/>\n<a href=\"http:\/\/3.bp.blogspot.com\/-Q1umQVVGIrY\/Wwm3yEazuYI\/AAAAAAAAEd4\/GUniWFSlIeAt1iMFWUpq7aMfORvMzf_4wCK4BGAYYCw\/s1600\/ampicilina2.jpg\" style=\"clear: right;float: right;margin-bottom: 1em;margin-left: 1em\"><img decoding=\"async\" border=\"0\" src=\"https:\/\/3.bp.blogspot.com\/-Q1umQVVGIrY\/Wwm3yEazuYI\/AAAAAAAAEd4\/GUniWFSlIeAt1iMFWUpq7aMfORvMzf_4wCK4BGAYYCw\/s400\/ampicilina2.jpg\" \/><\/a>Hacer una torre de entre 4 y 8<br \/>\nplacas y con una mano abrir la tapa de la placa inferior sujetando el resto de la torre, mientras que con<br \/>\nla otra mano se a\u00f1ade el agar LB.<\/p>\n<p>&nbsp;Rellenar la placa entre un tercio y la mitad de su capacidad (\u00bb12 ml).<br \/>\nTapar esa placa, y continuar con la placa superior en la torre. Cuando se hayan rellenado todas las<br \/>\nplacas dejarlas enfriar en esa posici\u00f3n.<br \/>\n LB<\/p>\n<p>&nbsp;A continuaci\u00f3n, a\u00f1adir la ampicilina ya hidratada al agar LB sobrante en el matraz. Agitar el<br \/>\nmatraz brevemente para mezclarla. Rellenar las 16 placas rotuladas como LB\/amp seg\u00fan la t\u00e9cnica&nbsp;descrita antes.<\/p>\n<p><a href=\"http:\/\/3.bp.blogspot.com\/-AZvMuFnYGV8\/Wwm4JIzHO0I\/AAAAAAAAEeE\/nvMbkpaLlGModZhd58D-2gAFobHhzmqqACK4BGAYYCw\/s1600\/ampicilina%2B3.png\"><img decoding=\"async\" border=\"0\" height=\"101\" src=\"https:\/\/3.bp.blogspot.com\/-AZvMuFnYGV8\/Wwm4JIzHO0I\/AAAAAAAAEeE\/nvMbkpaLlGModZhd58D-2gAFobHhzmqqACK4BGAYYCw\/s320\/ampicilina%2B3.png\" width=\"320\" \/><\/a><\/p>\n<p>Por \u00faltimo, a\u00f1adir la arabinosa hidratada al agar LB con ampicilina sobrante en el matraz.<br \/>\nAgitar el matraz brevemente para mezclarla y rellenar las 8 placas marcadas como LB\/amp\/ara<br \/>\nutilizando la t\u00e9cnica ya descrita.<\/p>\n<p><a href=\"http:\/\/3.bp.blogspot.com\/-fr1Enfl8EaQ\/Wwm4q91wfnI\/AAAAAAAAEeQ\/Snt5ZCPc7Og9wf_LdmtrKJWOvTNhTMScgCK4BGAYYCw\/s1600\/ampicilina%2B4.png\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" border=\"0\" height=\"120\" src=\"https:\/\/3.bp.blogspot.com\/-fr1Enfl8EaQ\/Wwm4q91wfnI\/AAAAAAAAEeQ\/Snt5ZCPc7Og9wf_LdmtrKJWOvTNhTMScgCK4BGAYYCw\/s320\/ampicilina%2B4.png\" width=\"320\" \/><\/a><\/p>\n<p>&nbsp;Almacenar las placas<br \/>\nDespu\u00e9s de dejar las placas dos d\u00edas a temperatura ambiente se pueden utilizar o se pueden<br \/>\nalmacenar en columnas de hasta 20 placas de altura introduci\u00e9ndolas en bolsas. Guardar las placas en<br \/>\nla nevera de forma invertida y dentro de las bolsas hasta su uso.<\/p>\n<h4>\n<b><span style=\"color: blue\">&#8211; Preparaci\u00f3n paso 2<\/span><\/b><\/h4>\n<div>\n<i><span style=\"color: blue\">1. Rehidratar las bacterias&nbsp;<\/span><\/i><\/div>\n<div>\n<\/div>\n<div>\n<a href=\"http:\/\/1.bp.blogspot.com\/-mexOYV7mOzA\/Wwm6ASGAueI\/AAAAAAAAEec\/VcSo5QZoIrgW9EnjmUhazBh4pyOU9o6RgCK4BGAYYCw\/s1600\/rehidrataci%25C3%25B3n.png\" style=\"clear: right;float: right;margin-bottom: 1em;margin-left: 1em\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" border=\"0\" height=\"190\" src=\"https:\/\/1.bp.blogspot.com\/-mexOYV7mOzA\/Wwm6ASGAueI\/AAAAAAAAEec\/VcSo5QZoIrgW9EnjmUhazBh4pyOU9o6RgCK4BGAYYCw\/s320\/rehidrataci%25C3%25B3n.png\" width=\"320\" \/><\/a>Con una pipeta est\u00e9ril, rehidratar el liofilizado de E. coli HB101 a\u00f1adiendo 250 ml de la soluci\u00f3n de<br \/>\ntransformaci\u00f3n en el vial. Tapar el vial y dejar la suspensi\u00f3n 5 minutos a temperatura ambiente. Agitar<br \/>\nel vial antes de a\u00f1adirlo a las placas de LB. (Se utiliza la soluci\u00f3n de transformaci\u00f3n porque est\u00e1 est\u00e9ril.<br \/>\nEn su lugar se puede utilizar agua destilada est\u00e9ril). Guardar la bacteria rehidratada en la nevera hasta<br \/>\nel momento de su uso (en 24 horas a ser posible, y no m\u00e1s de 3 d\u00edas).<\/div>\n<div>\n<\/div>\n<div>\n<\/div>\n<div>\n<span style=\"background-color: white\"><span style=\"color: blue\"><i>2. Sembrar las placas para obtener colonias bacterianas aisladas<\/i>&nbsp;<\/span><\/span><\/div>\n<div>\n<\/div>\n<div>\nLas placas de LB se deben sembrar para obtener<br \/>\ncolonias aisladas de la bacteria y se deben incubar a 37 \u00baC durante 24-36 horas antes de la<br \/>\ntransformaci\u00f3n.&nbsp;<\/div>\n<div>\n<\/div>\n<div>\nPartiendo de la suspensi\u00f3n de E. coli preparada en el punto 1 y de 8 placas LB, sembrar una placa<br \/>\npara cada uno de los grupos de estudiantes. El prop\u00f3sito del aislamiento es formar colonias aisladas a<br \/>\npartir de una suspensi\u00f3n con una alta concentraci\u00f3n bacteriana.&nbsp;&nbsp;<\/div>\n<div>\n<\/div>\n<div>\na. Introducir el asa sin inclinar el<br \/>\nvial. Sacar el asa y extender en la placa como aparece en la figura inferior. La extensi\u00f3n se realiza<br \/>\nen cuatro cuadrantes. La primera extensi\u00f3n es para dispersar un poco las c\u00e9lulas. Deslizar el asa<br \/>\nde izquierda a derecha una docena de veces en cada uno de los cuadrantes. En cada cuadrante<br \/>\nconsecutivo las c\u00e9lulas est\u00e1n cada vez m\u00e1s diluidas, aumentando la posibilidad de obtener<br \/>\ncolonias aisladas.&nbsp;<\/div>\n<div>\n<\/div>\n<div>\nb. Es importante utilizar la mayor superficie posible de placa para realizar la extensi\u00f3n. Girar la placa<br \/>\n45 grados aproximadamente (de manera que se facilite el movimiento de la mano) y comenzar con<br \/>\nel segundo cuadrante. Tocar el cuadrante anterior un par de veces y luego continuar deslizando el<br \/>\nasa de izquierda a derecha unas 10 veces.&nbsp;<\/div>\n<div>\n<\/div>\n<div>\nc. Girar la placa de nuevo y repetir la acci\u00f3n.&nbsp;<\/div>\n<div>\n<\/div>\n<div>\nd. Girar la placa por \u00faltima vez y sembrar el \u00faltimo cuadrante. Repetir los pasos a-d en el resto de las<br \/>\nplacas de LB. Usar el mismo asa de siembra para todas las placas. Al terminar con cada placa,<br \/>\ntaparla inmediatamente para evitar su contaminaci\u00f3n.<\/div>\n<div>\n<\/div>\n<div>\n<a href=\"http:\/\/3.bp.blogspot.com\/-C9Dvg5POt6w\/Wwm7EgCto2I\/AAAAAAAAEeo\/II2GF9FM0IkV5wzYavD4AoPAScXY6fivACK4BGAYYCw\/s1600\/siembra.png\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" border=\"0\" height=\"200\" src=\"https:\/\/3.bp.blogspot.com\/-C9Dvg5POt6w\/Wwm7EgCto2I\/AAAAAAAAEeo\/II2GF9FM0IkV5wzYavD4AoPAScXY6fivACK4BGAYYCw\/s400\/siembra.png\" width=\"400\" \/><\/a><\/div>\n<div>\n<\/div>\n<div>\ne. Dejar las placas toda la noche en posici\u00f3n invertida en la estufa a 37 \u00baC o a temperatura ambiente<br \/>\ndurante 2-3 d\u00edas si no se dispone de estufa. Usar para la transformaci\u00f3n en las 24-36 horas<br \/>\nsiguientes. No refrigerarlas antes de su uso.<\/div>\n<div>\n<\/div>\n<div>\n&nbsp;f. E. coli produce colonias de color crema, redondas y de bordes lisos. No utilizar las placas<br \/>\ncontaminadas con otras colonias.<\/div>\n<div>\n<b><span style=\"color: blue\"><br \/><\/span><\/b><br \/>\n<i><span style=\"color: blue\">3. Preparar el pl\u00e1smido pGLO&nbsp;<\/span><\/i><\/p>\n<p><a href=\"http:\/\/3.bp.blogspot.com\/-N5lzeVUCnPE\/Wwm8Cjyp6eI\/AAAAAAAAEe0\/RxVtjhHYRZ8VWGIpysESu5VXkerahCapwCK4BGAYYCw\/s1600\/plasmido%2B1.png\" style=\"clear: right;float: right;margin-bottom: 1em;margin-left: 1em\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" border=\"0\" height=\"144\" src=\"https:\/\/3.bp.blogspot.com\/-N5lzeVUCnPE\/Wwm8Cjyp6eI\/AAAAAAAAEe0\/RxVtjhHYRZ8VWGIpysESu5VXkerahCapwCK4BGAYYCw\/s320\/plasmido%2B1.png\" width=\"320\" \/><\/a>Con una nueva pipeta est\u00e9ril a\u00f1adir 250 ml de la soluci\u00f3n de transformaci\u00f3n en el vial que contiene el<br \/>\npl\u00e1smido pGLO liofilizado. La cantidad de ADN es tan peque\u00f1a que puede parecer que el vial est\u00e1<br \/>\nvac\u00edo. Si es posible, guardar el ADN rehidratado en la nevera (Se utiliza la soluci\u00f3n de transformaci\u00f3n<br \/>\nporque est\u00e1 est\u00e9ril y no contienen nucleasas. En su lugar se puede utilizar agua destilada est\u00e9ril).<br \/>\n<b><span style=\"color: blue\"><br \/><\/span><\/b><br \/>\n<b><span style=\"color: blue\">&#8211; Preparaci\u00f3n paso 3:&nbsp;<\/span><\/b>Gu\u00eda r\u00e1pida para el uso del kit de transformaci\u00f3n<\/p>\n<p>1. Etiquetar los tubos eppendorf cerrados, uno<br \/>\ncomo +pGLO y otro como \u2013pGLO.<br \/>\n<a href=\"http:\/\/3.bp.blogspot.com\/-1RUi4tzKWb0\/Wwm9fBMH3LI\/AAAAAAAAEfA\/5XZD_AA53aUi16kqZE-a0_icvi9jfSw8QCK4BGAYYCw\/s1600\/plasmido2.png\" style=\"clear: right;float: right;margin-bottom: 1em;margin-left: 1em\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" border=\"0\" height=\"400\" src=\"https:\/\/3.bp.blogspot.com\/-1RUi4tzKWb0\/Wwm9fBMH3LI\/AAAAAAAAEfA\/5XZD_AA53aUi16kqZE-a0_icvi9jfSw8QCK4BGAYYCw\/s400\/plasmido2.png\" width=\"192\" \/><\/a>&nbsp;Poner los tubos<br \/>\nen una gradilla de corcho.<\/p>\n<p>&nbsp;2. Abrir los tubos y con una pipeta est\u00e9ril a\u00f1adir<br \/>\n250 ml de la soluci\u00f3n de transformaci\u00f3n (CaCl2).<\/p>\n<p>3. Poner los tubos en hielo.<\/p>\n<p>4. Con un asa de siembra est\u00e9ril coger una colonia<br \/>\nde la placa. Abrir el tubo +pGLO e introducir el<br \/>\nasa en la soluci\u00f3n de transformaci\u00f3n. Girar el<br \/>\nasa entre los dedos \u00edndice y pulgar hasta que la<br \/>\ncolonia se disperse totalmente en la soluci\u00f3n de<br \/>\ntransformaci\u00f3n (sin que queden fragmentos<br \/>\nflotantes). Dejar el tubo en la gradilla en hielo.<br \/>\nCon otro asa est\u00e9ril repite la operaci\u00f3n con el<br \/>\ntubo \u2013pGLO.<\/p>\n<p>5. Situar la soluci\u00f3n con el pl\u00e1smido pGLO a la luz<br \/>\nUV y anotar las observaciones. Introducir un<br \/>\nnuevo asa est\u00e9ril en el vial que contiene el<br \/>\npl\u00e1smido y coger soluci\u00f3n plasm\u00eddica (como si<br \/>\ncogi\u00e9ramos jab\u00f3n para hacer pompas de<br \/>\njab\u00f3n). Llevarlo al tubo +pGLO, cerrarlo y dejar<br \/>\nel tubo en la gradilla en el hielo. Cerrar tambi\u00e9n<br \/>\nel tubo \u2013pGLO, pero sin a\u00f1adir el pl\u00e1smido.<br \/>\n \u00bfPor qu\u00e9? Pl\u00e1smido ADN<\/p>\n<p>&nbsp;6. Incubar los tubos en hielo 10 minutos.<br \/>\nAsegurarse de que el fondo de los tubos est\u00e1<br \/>\nen contacto con el hielo.<\/p>\n<p><a href=\"http:\/\/3.bp.blogspot.com\/-tb9s14YsWn0\/Wwm-VZYWfJI\/AAAAAAAAEfM\/1rxgorQJhT02Pcb_vFA5V9Jk3RfN8GwjwCK4BGAYYCw\/s1600\/plasmido3.png\" style=\"clear: right;float: right;margin-bottom: 1em;margin-left: 1em\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" border=\"0\" height=\"400\" src=\"https:\/\/3.bp.blogspot.com\/-tb9s14YsWn0\/Wwm-VZYWfJI\/AAAAAAAAEfM\/1rxgorQJhT02Pcb_vFA5V9Jk3RfN8GwjwCK4BGAYYCw\/s400\/plasmido3.png\" width=\"207\" \/><\/a>7. Mientras que los tubos permanecen en el hielo,<br \/>\netiquetar las placas de agar en la base de la<br \/>\nsiguiente forma: una placa LB\/amp y una<br \/>\nLB\/amp\/ara como +pGLO, y otra LB\/amp y otra<br \/>\nLB\/amp\/ara como \u2013pGLO.<\/p>\n<p>8. Choque t\u00e9rmico. Llevar los tubos en la gradilla<br \/>\nal ba\u00f1o ya preparado a 42 \u00baC, e introducirlos<br \/>\nall\u00ed durante 50 segundos exactos. Asegurarse<br \/>\nde colocar bien la gradilla para que el fondo de<br \/>\nlos tubos est\u00e9 en contacto con el agua.<br \/>\nPasados los 50 segundos, llevar de nuevo los<br \/>\ntubos al hielo. El cambio de hielo al ba\u00f1o y<br \/>\nviceversa debe hacerse con rapidez. Dejar los<br \/>\ntubos en el hielo 2 minutos.<\/p>\n<p>9. Sacar la gradilla del hielo y dejarla en la mesa.<br \/>\nAbre uno de los tubos, y con una nueva pipeta<br \/>\nest\u00e9ril, a\u00f1ade 250 ml de caldo LB al tubo y<br \/>\nci\u00e9rralo. Repetir la operaci\u00f3n con otra pipeta<br \/>\nest\u00e9ril en el otro tubo. Incubar los tubos 10<br \/>\nminutos a temperatura ambiente.<br \/>\n Caldo LB +pGLO \u2013 pGLO<\/p>\n<p>10. Agitar los tubos golpe\u00e1ndolos con el dedo. Con<br \/>\nuna pipeta est\u00e9ril para cada tubo, pasar 100 ml<br \/>\nde cada tubo a las placas correspondientes.<\/p>\n<p><a href=\"http:\/\/3.bp.blogspot.com\/-_JoHDW-9Lco\/Wwm_OfGGwhI\/AAAAAAAAEfY\/7xI-_m7NlRsCB5VKJG4IwmjJxrZbonL-gCK4BGAYYCw\/s1600\/plasmido4.png\" style=\"clear: right;float: right;margin-bottom: 1em;margin-left: 1em\"><img decoding=\"async\" border=\"0\" src=\"https:\/\/3.bp.blogspot.com\/-_JoHDW-9Lco\/Wwm_OfGGwhI\/AAAAAAAAEfY\/7xI-_m7NlRsCB5VKJG4IwmjJxrZbonL-gCK4BGAYYCw\/s400\/plasmido4.png\" \/><\/a>11. Usando un asa de siembra est\u00e9ril para cada<br \/>\ntubo, extender el l\u00edquido por toda la superficie<br \/>\nde la placa, haciendo estr\u00edas en el agar en<br \/>\ntodos las direcciones.<\/p>\n<p>12. Apilar las placas y empaquetarlas con cinta<br \/>\nadhesiva todas juntas. Poner el nombre del<br \/>\ngrupo e introducirlas en posici\u00f3n invertida en la<br \/>\nestufa a 37 \u00baC hasta el d\u00eda siguiente.<br \/>\n<span style=\"color: blue\"><br \/><\/span><\/div>\n<p><span style=\"color: blue\"><br \/><\/span><br \/>\n<span style=\"color: blue\"><br \/><\/span><br \/>\n<span style=\"color: blue\"><br \/><\/span><br \/>\n<span style=\"color: blue\"><br \/><\/span><br \/>\n<\/p>\n<h3>\n<span style=\"color: blue\">Resultados<\/span><\/h3>\n<p>\n<span style=\"color: blue\">A. Recogida de resultados&nbsp;<\/span><\/p>\n<p>Observa los resultados obtenidos tras la transformaci\u00f3n a la luz normal de la habitaci\u00f3n. Despu\u00e9s sit\u00faa<br \/>\nlas placas bajo luz ultravioleta y observa lo que ocurre.<\/p>\n<p>1. Observa atentamente y dibuja lo que ves en cada placa. Pon tus dibujos en la tabla de resultados<br \/>\nen la columna de la derecha. Apunta los resultados para poder comparar las observaciones de las<br \/>\nc\u00e9lulas +pGLO con las observaciones de las c\u00e9lulas no transformadas.<br \/>\nAnota las siguientes observaciones para cada placa.<\/p>\n<p>2. \u00bfCu\u00e1nto crecimiento se observa en cada placa, a simple vista?<\/p>\n<p>3. \u00bfDe qu\u00e9 color son las bacterias?<\/p>\n<p>4. \u00bfCu\u00e1ntas colonias bacterianas hay en cada placa? (Cu\u00e9ntalas).<\/p>\n<p><a href=\"http:\/\/4.bp.blogspot.com\/-BhXLI8yp2m0\/WwnA8zARd5I\/AAAAAAAAEfk\/B9OpRUijclMshYwQl3wy3z00li7EgokpQCK4BGAYYCw\/s1600\/resultados%2B1.png\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" border=\"0\" height=\"320\" src=\"https:\/\/4.bp.blogspot.com\/-BhXLI8yp2m0\/WwnA8zARd5I\/AAAAAAAAEfk\/B9OpRUijclMshYwQl3wy3z00li7EgokpQCK4BGAYYCw\/s400\/resultados%2B1.png\" width=\"400\" \/><\/a><br \/>\n<span style=\"color: blue\"><br \/><\/span><br \/>\n<span style=\"color: blue\">B: \u00bfQu\u00e9 es lo que brilla?&nbsp;<\/span><\/p>\n<p>Si se observa un color verde fluorescente en las colonias de E. coli, debemos plantear una nueva<br \/>\npregunta:<br \/>\n\u00bfCu\u00e1les son las dos posibles fuentes de fluorescencia en las colonias cuando se exponen a<br \/>\nla luz ultravioleta?<br \/>\nExplica:<\/p>\n<p>1. Recuerda qu\u00e9 observaste cuando iluminaste con luz ultravioleta el vial que conten\u00eda el pl\u00e1smido<br \/>\npGLO y anota tus observaciones.<\/p>\n<p>2. \u00bfCu\u00e1l de las dos posibles fuentes de fluorescencia puede ser eliminada ahora?<\/p>\n<p>3. \u00bfQu\u00e9 indica esta observaci\u00f3n sobre la fuente de fluorescencia?<\/p>\n<p>4. Describe qu\u00e9 evidencias indican si la transformaci\u00f3n gen\u00e9tica se ha realizado con \u00e9xito o no.<\/p>\n<p><i><span style=\"color: blue\"><br \/><\/span><\/i><br \/>\n<i><span style=\"color: blue\">C.&nbsp;Interacci\u00f3n entre los genes y el medio<\/span><\/i><\/p>\n<p>Mira de nuevo tus cuatro placas. \u00bfObservas alguna colonia de E. coli en la placa LB que no<br \/>\ncontenga ampicilina y arabinosa?<\/p>\n<p>1. Bas\u00e1ndote en tus resultados, \u00bfpuedes decir si estas bacterias son resistentes a ampicilina<br \/>\nobserv\u00e1ndolas en la placa LB?<\/p>\n<p>2. \u00bfC\u00f3mo modificar\u00edas el medio (el agar en el que est\u00e1n creciendo) para poder saber si son<br \/>\nresistentes a ampicilina?<\/p>\n<p>3. Muy a menudo las caracter\u00edsticas de un organismo se deben a la combinaci\u00f3n de sus genes y del<br \/>\nmedio.<\/p>\n<p>Reflexiona sobre el color verde que viste en las bacterias transformadas:<\/p>\n<p>a. \u00bfQu\u00e9 dos factores ambientales deben estar presentes para que puedas ver el color verde? (Una<br \/>\npista: un factor est\u00e1 en la placa y el otro en la forma c\u00f3mo miras las bacterias).<\/p>\n<p>b. \u00bfCu\u00e1l de los dos factores ambientales se\u00f1alados en la pregunta anterior hacen a la bacteria<br \/>\ntransformada que aparezca verde?<\/p>\n<p>c. \u00bfQu\u00e9 ventajas tendr\u00e1 para un organismo el poder activar o desactivar determinados genes en<br \/>\nrespuesta a diferentes condiciones?<\/p>\n<p><i><span style=\"color: blue\">D.&nbsp; C\u00e1lculo de la Tasa<br \/>\n de transformaci\u00f3n<\/span><\/i><\/p>\n<p>&nbsp;Tu pr\u00f3xima tarea es aprender a determinar hasta qu\u00e9 punto se ha producido la transformaci\u00f3n de E.<br \/>\ncoli, usando para ello una medida cuantitativa denominada tasa de transformaci\u00f3n.<br \/>\nEn muchos experimentos, es importante transformar la mayor cantidad posible de c\u00e9lulas.<\/p>\n<p>&nbsp;La tasa de transformaci\u00f3n se calcula para ayudar a los<br \/>\ncient\u00edficos a determinar la eficacia del proceso de transformaci\u00f3n.<\/p>\n<p>M\u00e9todo: Tienes que calcular la tasa de transformaci\u00f3n, la cual te indicar\u00e1 tu habilidad a la hora de introducir<br \/>\nmol\u00e9culas de ADN en las c\u00e9lulas bacterianas.<br \/>\nLa tasa de transformaci\u00f3n es un n\u00famero, que representa<br \/>\nel n\u00famero total de c\u00e9lulas bacterianas que expresan la prote\u00edna GFP, entre la cantidad de ADN usada<br \/>\nen el experimento. Nos indica el n\u00famero total de c\u00e9lulas bacterianas transformadas por microgramo de<br \/>\nADN.<\/p>\n<p>La tasa de transformaci\u00f3n se calcula usando la siguiente f\u00f3rmula:<\/p>\n<p>Tasa de transformaci\u00f3n = N\u00famero total de c\u00e9lulas que crecen en la placa \/ Cantidad de ADN (mg) en la placa<\/p>\n<p>&nbsp;Por tanto, para poder calcular la tasa de transformaci\u00f3n, necesitas saber:<\/p>\n<p>1. El n\u00famero total de colonias verde fluorescente que crecen en la placa LB\/amp\/ara.<\/p>\n<p>2. La cantidad total de pl\u00e1smido pGLO en las c\u00e9lulas bacterianas y presente en la placa<br \/>\nLB\/amp\/ara<\/p>\n<p>C\u00e1lculos:<\/p>\n<p>1. Determinaci\u00f3n del n\u00famero total de colonias verde fluorescente que crecen en la placa<br \/>\nLB\/amp\/ara.<br \/>\nSit\u00faa tu placa LB\/amp\/ara bajo luz UV.<br \/>\n&nbsp;Se supone que cada colonia de la placa procede de una<br \/>\n\u00fanica c\u00e9lula, la cual, tras m\u00faltiples y sucesivas reproducciones, origina la colonia bacteriana.<br \/>\nLa<br \/>\nmanera m\u00e1s sencilla de determinar el n\u00famero total de colonias verde fluorescente es contar las<br \/>\ncolonias presentes en la placa.<\/p>\n<p>&nbsp;N\u00famero total de c\u00e9lulas =<\/p>\n<p>\n2. Determinaci\u00f3n de la cantidad total de pl\u00e1smido pGLO en las c\u00e9lulas bacterianas y presente<br \/>\nen la placa LB\/amp\/ara.<br \/>\nPara determinar la cantidad de ADN del pl\u00e1smido pGLO que hay en las c\u00e9lulas<br \/>\nbacterianas presentes en la placa LB\/amp\/ara necesitamos saber: (a) La cantidad de<br \/>\nADN con la que empezamos el experimento, y (b) qu\u00e9 fracci\u00f3n del ADN (en la bacteria)<br \/>\nrealmente se a\u00f1adi\u00f3 a las placas de LB\/amp\/ara.<br \/>\nUna vez calculado estos dos factores, tendr\u00e1s que multiplicar la cantidad total de pl\u00e1smido<br \/>\npGLO usada en el experimento por la fracci\u00f3n de ADN que aparece en las placas de LB\/amp\/ara.<\/p>\n<p>&nbsp;(a)<i> Determinaci\u00f3n de la cantidad total de pl\u00e1smido pGLO&nbsp;<\/i><\/p>\n<p>La cantidad total de ADN utilizada inicialmente es igual al producto de la concentraci\u00f3n y el<br \/>\nvolumen utilizados:<br \/>\nADN (mg) = Concentraci\u00f3n ADN (mg\/ml) x Volumen ADN (ml)<\/p>\n<p>En este experimento utilizaste 10 ml de pGLO a la concentraci\u00f3n de 0.08 mg\/ml.<\/p>\n<p>Es decir, que<br \/>\ncada microlitro de la soluci\u00f3n conten\u00eda 0.08 mg del ADN pl\u00e1sm\u00eddico pGLO.<\/p>\n<p>Calcula la cantidad total de ADN utilizada:<br \/>\nCantidad total de ADN (mg) =<\/p>\n<p>&nbsp;\u00bfPara qu\u00e9 te sirve este dato?<\/p>\n<p>(b)<i> Determinaci\u00f3n de la fracci\u00f3n de ADN realmente transferido a la placa de LB\/amp\/ara.<\/i><\/p>\n<p>&nbsp;Dado que no todo el ADN a\u00f1adido al cultivo bacteriano pasa a la placa de agar, necesitas saber<br \/>\ncu\u00e1nto ADN pas\u00f3 realmente a la placa LB\/amp\/ara. Para calcularlo, divide el volumen de ADN<br \/>\nque pusiste en la placa entre el volumen total que hab\u00eda en el tubo que conten\u00eda el ADN.<\/p>\n<p>La<br \/>\nf\u00f3rmula a utilizar ser\u00eda:<br \/>\nFracci\u00f3n ADN utilizada = Volumen en la placa (ml) \/ Volumen total tubo (ml)<\/p>\n<p>Pasaste 100 ml de la soluci\u00f3n de c\u00e9lulas que conten\u00edan el ADN, de un tubo con un volumen total<br \/>\nde 510 ml.<\/p>\n<p>\u00bfRecuerdas por qu\u00e9 conten\u00eda 510 ml? Consulta el protocolo, anota los vol\u00famenes que<br \/>\na\u00f1adiste en cada paso y suma las cantidades.<\/p>\n<p>Usa la siguiente f\u00f3rmula para calcular la fracci\u00f3n de ADN plasm\u00eddico pGLO que pas\u00f3 a la<br \/>\nplaca LB\/amp\/ara.<\/p>\n<p>&nbsp;<b>Fracci\u00f3n de ADN<\/b> =<\/p>\n<p>\u00bfPara qu\u00e9 te sirve este dato?<\/p>\n<p>Por tanto, \u00bfcu\u00e1ntos microgramos de ADN del pl\u00e1smido pGLO pasaste a las placas<br \/>\nLB\/amp\/ara?<br \/>\nPara contestar esta pregunta, debes multiplicar la cantidad total de ADN pGLO usada por la<br \/>\nfracci\u00f3n de ADN pGLO que pas\u00f3 a la placa de LB\/amp\/ara:<\/p>\n<p>ADN pGLO transferido (mg) = cantidad total de ADN pGLO usada (mg) x fracci\u00f3n de ADN pGLO<\/p>\n<p><b>&nbsp;ADN pGLO (mg)<\/b> =<\/p>\n<p>\u00bfQu\u00e9 te dice este dato? Mira todos los c\u00e1lculos hechos hasta ahora, y rellena la siguiente tabla:<\/p>\n<p><a href=\"http:\/\/4.bp.blogspot.com\/-3Dv9BmYdc-E\/WwnEJKQsY6I\/AAAAAAAAEfw\/fK3V026gUtkBncSf3pAWZm6iP1cMaucrwCK4BGAYYCw\/s1600\/datos.png\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" border=\"0\" height=\"86\" src=\"https:\/\/4.bp.blogspot.com\/-3Dv9BmYdc-E\/WwnEJKQsY6I\/AAAAAAAAEfw\/fK3V026gUtkBncSf3pAWZm6iP1cMaucrwCK4BGAYYCw\/s400\/datos.png\" width=\"400\" \/><\/a><\/p>\n<p>Ahora usa los datos de la tabla para calcular la tasa de transformaci\u00f3n:<br \/>\nTasa de transformaci\u00f3n = N\u00ba total de c\u00e9lulas que crecen en la placa \/ Cantidad de ADN (mg) en la placa<\/p>\n<p><b>Tasa de transformaci\u00f3n =&nbsp;<\/b><\/p>\n<p>\n<span style=\"color: blue\">EN EL V\u00cdDEO SE MUESTRAN LOS RESULTADOS OBTENIDOS<\/span><\/p>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>sophie rain onlyfans net worth En esta pr\u00e1ctica, los estudiantes realizar\u00e1n un procedimiento conocido como transformaci\u00f3n gen\u00e9tica. 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